HPLC是指具有高分离效能的柱液相色谱法。高效液相色谱法（HPLC）是色谱法的一个重要分支，应用范围十分广泛，已成为化学、工业、商检等领域中重要的分离分析技术应用。

HPLC对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。

一、HPLC的原理

溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

二、HPLC的特点：

1.高压

液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。

2. 高速

流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。

3. 高效

HPLC的分离效率高于普通液相色谱，在发展过程中又出现了许多新型固定相，使分离效率大大提高。

4.高灵敏度

高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般微升。

5. 适应范围宽

高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。据统计，在已知化合物中，能用液相色谱分析的约占70～80%。

三、HPLC系统组成

HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。此外，还可根据需要配置梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代HPLC 仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。制备型HPLC 仪还备有自动馏分收集装置。

四、HPLC的应用

分离混合物：

高压液相色谱能高效分离各种混合物，包括有机化合物、无机化合物、生物大分子等。

定量分析：

通过测量峰面积或峰高，可以对样品中的各组分进行定量分析。

纯度检测：

高压液相色谱可以用于检测样品的纯度，通过比较样品峰与标准品的峰，可以确定样品的纯度。

结构鉴定：

通过与其他技术如质谱联用，可以推断出样品的分子结构。